Testes de Aglutinação

A reação de aglutinação caracteriza-se pela formação de agregados visíveis como resultado da interação de anticorpos específicos e partículas insolúveis que contêm determinantes antigênicos em sua superfície. Está entre os imunoensaios mais consagrados e tradicionais. 

A aglutinação pode ocorrer tanto com partículas que apresentam determinantes antigênicos naturais em sua superfície (hemácias, bactérias, protozoários, etc.) como com partículas inertes (partículas de látex, poliestireno, bentonita, etc.). No primeiro caso, a reação é dita aglutinação direta, e no segundo, aglutinação indireta ou passiva. 

As reações de aglutinação são muito empregadas para o diagnóstico laboratorial de doenças causadas por vírus, bactérias, protozoários e fungos, doenças autoimunes, na detecção de hormônios, na tipagem de grupos sanguíneos dos sistemas ABO e Rh, etc. 

Os testes de aglutinação podem ser realizados em tubos ou placas. Se o soro possuir um elevado título de anticorpos aglutinantes, pode-se observar o fenômeno de prozona, já explicado anteriormente, obtendo-se falsos resultados negativos. Esse efeito é eliminado empregando-se  diluições seriadas do soro.

      

Teste de Aglutinação Direta

Na reação de aglutinação direta utilizam-se partículas antigênicas insolúveis em sua forma íntegra ou fragmentada. Hemácias, bactérias, fungos, protozoários podem ser aglutinados diretamente por anticorpo. Os testes para detectar anticorpos específicos são realizados empregando-se diluições em série do anticorpo, frente a uma quantidade constante de antígeno. Após um período de incubação, a aglutinação se completa e o resultado é geralmente expresso como a máxima diluição em que ocorre a aglutinação.

Teste de Aglutinação Direta (Reação Sistema ABO do sangue)

• Teste de Inibição de Hemaglutinação Direta

A inibição da hemaglutinação direta é baseada na capacidade que certos antígenos virais têm de, espontaneamente, aglutinarem certos tipos de hemácias. Os anticorpos, se presentes na amostra, revestem as partículas virais, resultando na inibição da aglutinação, indicando um teste positivo para a presença de anticorpos. Estes testes não distinguem entre IgG e IgM. Este método é usado para detectar anticorpos contra o vírus da rubéola, sarampo, influenza e certos enterovírus.

      

Teste de Aglutinação Passiva ou indireta

Para o teste de aglutinação passiva, as hemácias e as partículas inertes (látex, bentonita, “sepharose”, leveduras, etc.) podem ser sensibilizadas por adsorção passiva, devida ao contato direto com os antígenos solúveis, por adsorção via agentes químicos, como ácido tânico, cloreto de cromo e por conjugação do antígeno, por meio de ligações químicas covalentes, fornecendo reagentes estáveis. Devido à grande diversidade de antígenos que podem se ligar às células ou partículas, a aplicação dos testes de aglutinação passiva é muito variada.

• Teste de Hemaglutinação Passiva

Hemácias estão entre os melhores suportes de antígenos para os testes de aglutinação, pois há uma série de antígenos que pode ser ligada à sua superfície para fornecer um sistema indicador sensível na detecção de anticorpos. Além disso, os testes em placa permitem que a determinação do ponto final da reação seja feita diretamente.

Hemácias possuem uma superfície complexa, o que facilita a ligação de muitos antígenos e, frequentemente, acarreta a presença de anticorpos heterófilos indesejados no soro de muitos animais. Tais anticorpos devem ser removidos antes da execução do teste. Antígenos polissacarídeos prontamente aderem a hemácias, enquanto antígenos protéicos requerem pré-tratamento com ácido tânico ou cloreto de cromo.

O teste em placa utiliza pequenas quantidades de reagentes e é considerado positivo quando se verifica a formação de tapete cobrindo o fundo da cavidade da placa em “V”, e negativo quando as hemácias sedimentam formando um “botão” compacto. O título da amostra testada será a máxima diluição em que ainda se observa a formação do tapete.

O teste detecta anticorpos das classes IgG e IgM e, embora os anticorpos IgM sejam 750 vezes mais eficientes na aglutinação que os IgG, a quantidade de antígeno necessária para se obter a máxima reatividade com IgM é muito maior do que a necessária para a máxima reatividade com IgG.

 

Teste de Hemaglutinação Passiva

•  Teste de Inibição de Hemaglutinação Passiva

O teste de inibição de hemaglutinação passiva é sensível e específico na detecção de pequenas quantidades de antígenos solúveis, haptenos ou anticorpos que competem com a substância homóloga com que a hemácia foi sensibilizada. Desta forma, o princípio do teste baseia-se na competição, pelos sítios de combinação do anticorpo, entre o antígeno fixado à hemácia e o antígeno solúvel ou o hapteno. O grau de inibição relaciona-se com a quantidade do antígeno presente na amostra e, também com a afinidade pelos sítios de combinação do anticorpo.

Este método requer pequenas quantidades de reagentes, apresenta especificidade elevada e pode ser empregado em sistemas em que antígenos solúveis ainda não foram obtidos. Tem sido empregado na detecção de antígeno na hepatite e na hemofilia.

• Teste de Aglutinação do Látex

Partículas de látex são esferas de poliestireno que podem ser utilizadas como suportes na adsorção de proteína solúvel e antígenos polissacarídicos, funcionando como sistema indicador da reação antígeno-anticorpo.

O teste pode ser empregado na pesquisa de antígenos ou de anticorpos. A aplicação mais comum é na detecção do fator reumatoide , que é anticorpo da classe IgM pentamérico dirigido contra IgG. Adsorvendo IgG passivamente às partículas do látex, haverá a exposição dos determinantes de IgG que reagem com o fator reumatoide, resultando em aglutinação. Fator reumatoide (FR) é um anticorpo contra a porção Fc da IgG. O fator reumatoide e a IgG se unem para formar complexos imunes que contribuem para causar doenças reumatológicas. Essa técnica também é empregada na pesquisa da proteína C que aparece no soro de pacientes na fase aguda de várias infecções, como estafilocócica ou estreptocócica, febre reumática, etc.

hCG Látex - Teste de Gravidez (Inibição da Aglutinação)

O hormônio placentário, Gonadotrofina Coriônica Humana (hCG) aparece na urina de mulheres grávidas e geralmente indica um teste positivo de gravidez. O teste é realizado em urina de mulheres, após ausência da menstruação, para detecção de Gonadotrofina Coriônica Humana. O teste irá detectar o hormônio por inibição da aglutinação hCG LÁTEX EBRAM. hCG LÁTEX EBRAM pode detectar a gravidez positiva após 3 dias de atraso da menstruação. Porém, resultados negativos podem ser observados em testes de gravidez realizado precocemente, devido ao baixo nível de hCG. Nestes casos, os testes poderão ser repetidos depois de uma semana. Os componentes do teste consistem de um antígeno na forma de suspensão de hCG aderidos na superfície das partículas de látex e um reagente contendo anticorpos anti-hCG, subunidade Beta. O hCG aderido às partículas de látex irá reagir com anticorpos e causar aglutinação do mesmo. Quando o anticorpo é misturado com hCG da urina de mulheres grávidas, o anticorpo é bloqueado e não irá aglutinar o látex. Não havendo hCG na urina, o anticorpo não será bloqueado e o látex irá aglutinar. Assim, a aglutinação do látex indica um teste de gravidez negativo.

Fontes: 

http://slideplayer.com.br/slide/375946/

http://pt.wikipedia.org/wiki/Fator_reumatoide

http://www.ebram.com/intuse/906.intuse.pdf

http://sitebiomedico.br.tripod.com/infeccoes.htm

Ferreira, A. Watter; Ávila, Sandra L.M. Diagnóstico Laboratorial .1996, editora Guanabara Koogan, Rio de Janeiro - RJ.